公司新聞
?昨天（8月12日），1類新藥銀杏內(nèi)酯B注射液項(xiàng)目I期臨床試驗(yàn)（下稱銀杏內(nèi)酯B項(xiàng)目）啟動會在南寧市第一人民醫(yī)院順利舉行。此次會議的召開標(biāo)志著銀杏內(nèi)酯B項(xiàng)目正式進(jìn)入Ⅰ期臨床研究階段。 銀杏內(nèi)酯B注射液屬化藥1類新藥，將采用單中心、隨機(jī)、雙盲、安慰劑對照、單劑量及多劑量遞增給藥的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，設(shè)多個(gè)劑量組進(jìn)行劑量遞增，觀察受試者的安全性和耐受性，同時(shí)進(jìn)行藥代動力學(xué)特征及初步的物料平衡評估。博濟(jì)醫(yī)藥將為其Ⅰ期臨床研究提供全程CRO服務(wù)。 南寧市第一人民醫(yī)院機(jī)構(gòu)辦公室主任兼I期研究室主任鐘慧（項(xiàng)目PI）、I期研究室副主任劉曦、博濟(jì)醫(yī)藥I期臨床運(yùn)營部項(xiàng)目經(jīng)理龔玲等有關(guān)單位負(fù)責(zé)人參加了此次會議。 會議伊始，鐘慧教授代表臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)發(fā)表講話。她表示，我國的心腦血管患者數(shù)排世界第一，銀杏內(nèi)酯B注射液作為治療心腦血管一類新藥，其重要意義和價(jià)值不言而喻。經(jīng)過前期多輪會議探討，目前已對研究的整體策劃、臨床試驗(yàn)方案等板塊進(jìn)行了充分論證，希望在各方的共同努力下，保質(zhì)保量快速推進(jìn)該項(xiàng)目的Ⅰ期臨床試驗(yàn)，為該項(xiàng)目的后續(xù)研究打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 隨后，龔玲就該項(xiàng)目研究背景、試驗(yàn)方案、試驗(yàn)流程、藥物配制標(biāo)準(zhǔn)操作流程、試驗(yàn)過程中的特別注意事項(xiàng)等進(jìn)行了匯報(bào)，并介紹項(xiàng)目EDC使用、生物樣本預(yù)處理注意要點(diǎn)及SUASR上報(bào)要求等。與會者在鐘慧教授的帶領(lǐng)下就入排標(biāo)準(zhǔn)、藥物配制、受試者管理等問題進(jìn)行了討論，并形成了一致意見。 博濟(jì)醫(yī)藥相關(guān)負(fù)責(zé)人介紹，在臨床上應(yīng)用的銀杏類藥物多為采用有效部位為主藥的復(fù)方制劑，像銀杏內(nèi)酯B這種單一有效成分新藥有可能進(jìn)一步提高療效，提高用藥的安全性，更易于控制藥品質(zhì)量，更有臨床應(yīng)用前景，有望成為急性腦缺血性類疾病治療藥物的新選擇。“銀杏內(nèi)酯B項(xiàng)目前各項(xiàng)準(zhǔn)備工作進(jìn)展順利，預(yù)計(jì)首批受試者將于下周入組。” 關(guān)于博濟(jì)醫(yī)藥 臨床研究服務(wù)： 博濟(jì)醫(yī)藥擁有一支規(guī)模龐大、專業(yè)成熟的臨床研究隊(duì)伍，可提供包括醫(yī)學(xué)、項(xiàng)目管理、監(jiān)查、稽查、數(shù)據(jù)管理和統(tǒng)計(jì)分析、生物樣本檢測在內(nèi)的臨床試驗(yàn)全流程解決方案。截至2020年，博濟(jì)醫(yī)藥服務(wù)的客戶超1000家，完成800多項(xiàng)臨床試驗(yàn)項(xiàng)目，助力客戶獲得新藥證書60多項(xiàng)、生產(chǎn)批件超過80項(xiàng)。擁有豐富的臨床試驗(yàn)服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，服務(wù)項(xiàng)目涵蓋臨床研究各個(gè)領(lǐng)域，在腫瘤、肝病、消化等創(chuàng)新藥領(lǐng)域擁有獨(dú)特的臨床服務(wù)體系。 博濟(jì)醫(yī)藥在全國設(shè)有40多個(gè)臨床監(jiān)查網(wǎng)點(diǎn)，與全國近600個(gè)臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)展開合作，并運(yùn)用ORACLE OC/RDC及CTMS系統(tǒng)，控制臨床數(shù)據(jù)采集的及時(shí)性、管理臨床試驗(yàn)過程的規(guī)范性。
2021-08-13
關(guān)于“2021第三屆粵港澳大灣區(qū)生物醫(yī)藥創(chuàng)新高峰論壇”延期舉行通知尊敬的各位專家及全體參會嘉賓： 鑒于全國多地散發(fā)的疫情防控形勢，經(jīng)大會組委會慎重決定，原定于2021年8月14日在廣州舉辦的“2021第三屆粵港澳大灣區(qū)生物醫(yī)藥創(chuàng)新高峰論壇”將延期到2021年10月16日在廣州科學(xué)城會議中心舉行，歡迎關(guān)注！ 大會組委會在各界的鼎力支持下做了大量艱苦和細(xì)致的準(zhǔn)備工作，在距離會議即將開始前作出延期是非常艱難和痛苦的決定，我們對會議延期深表遺憾！由此給大家?guī)聿槐?，深表歉意? 組委會向?qū)Ρ敬握搲M織工作給予巨大支持的各位專家致以崇高的敬意！對積極準(zhǔn)備參會的各界來賓以及關(guān)心支持本次論壇的社會各屆朋友表示深深的感謝！如有關(guān)于本次論壇的任何問題請聯(lián)系組委會工作人員。 在此，特別鳴謝大會指導(dǎo)單位、承辦單位、協(xié)辦單位以及媒體的大力支持！ 前程千帆景，胸中百萬兵！花有重開日，人有重逢時(shí)！來日不遠(yuǎn)，十月相見！附組委會工作人員及聯(lián)系方式：馬小姐：15652387362潘小姐：15603052690陳小姐：15766393058 關(guān)于協(xié)會： 廣東省生物醫(yī)藥創(chuàng)新技術(shù)協(xié)會是在廣東省藥品監(jiān)督管理局指導(dǎo)下，經(jīng)廣東省民政廳注冊登記核準(zhǔn)的省一級非盈利性社會團(tuán)體。協(xié)會致力于引導(dǎo)企業(yè)科技創(chuàng)新、轉(zhuǎn)型升級、項(xiàng)目投資和引進(jìn)，積極傳遞國內(nèi)外的行業(yè)動態(tài)、政策法規(guī)和最新科研成果，為廣東省生物醫(yī)藥企業(yè)搭建一個(gè)溝通交流的平臺，支持廣東的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新發(fā)展。關(guān)于博濟(jì)醫(yī)藥：新藥&醫(yī)療器械一站式綜合服務(wù)CRO 廣州博濟(jì)醫(yī)藥生物技術(shù)股份有限公司（簡稱“博濟(jì)醫(yī)藥”， 股票代碼為300404）創(chuàng)建于2002年，2015年在深圳創(chuàng)業(yè)板上市，注冊資本金2.27億元，是一家為國內(nèi)外醫(yī)藥企業(yè)提供藥品、醫(yī)療器械、保健品研發(fā)與生產(chǎn)全流程“一站式”外包服務(wù)（CRO+CDMO）的新型高新技術(shù)企業(yè)。公司擁有5.1萬平方米的現(xiàn)代化辦公、實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)場所，目前有近800名員工，旗下?lián)碛卸嗉胰Y、控股子公司以及十余家關(guān)聯(lián)業(yè)務(wù)的參股公司；目前獲得中國醫(yī)藥外包公司10強(qiáng)、廣州市科技小巨人企業(yè)、廣東省誠信示范企業(yè)、廣州市著名商標(biāo)、中國最具投資價(jià)值企業(yè)50強(qiáng)、中國醫(yī)藥質(zhì)量管理協(xié)會CRO分會會長單位等榮譽(yù)稱號；是國內(nèi)僅有的兩家全流程服務(wù)CRO之一，也是以臨床試驗(yàn)為主要業(yè)務(wù)的CRO上市公司之一。 博濟(jì)醫(yī)藥“一站式”服務(wù)包括：新藥立項(xiàng)研究和活性篩選、藥學(xué)研究(原料、制劑)、藥物評價(jià)（藥效學(xué)、毒理學(xué)）、小分子創(chuàng)新藥一體化服務(wù)、臨床研究、中美雙報(bào)（注冊服務(wù)）、CDMO生產(chǎn)（MAH落地）、技術(shù)成果轉(zhuǎn)化等,涵蓋了新藥研發(fā)各個(gè)階段。
2021-08-06
?昨日（8月10日），由博濟(jì)醫(yī)藥提供全程CRO服務(wù)的NCO-48F膠囊Ia期臨床研究（簡稱“NCO-48F項(xiàng)目”）順利完成全部受試者出組。 值得一提的是，該項(xiàng)目于今年5月上旬啟動首例受試者入組，在3個(gè)月時(shí)間里，就完成了60例受試者出組，體現(xiàn)了博濟(jì)醫(yī)藥超高的工作效率。 NCO-48F項(xiàng)目是由豐誠集團(tuán)申報(bào)的化學(xué)藥物1類新藥，其Ia期臨床研究在南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院開展，由博濟(jì)醫(yī)藥提供全程CRO服務(wù)。 目前，NCO-48F項(xiàng)目已按方案計(jì)劃完成單次給藥及食物影響試驗(yàn)，全部受試者完成出組，這意味著該項(xiàng)目即將進(jìn)入數(shù)據(jù)清理及統(tǒng)計(jì)分析的收尾階段。根據(jù)已有數(shù)據(jù)觀察，項(xiàng)目安全性、耐受性良好，可以順利進(jìn)行后續(xù)的臨床研究。 博濟(jì)醫(yī)藥相關(guān)負(fù)責(zé)人表示，NCO-48F項(xiàng)目I期臨床研究各項(xiàng)相關(guān)進(jìn)展順利，預(yù)計(jì)將于9月份完成統(tǒng)計(jì)分析工作。在后續(xù)研究中，博濟(jì)醫(yī)藥將與各方繼續(xù)保持積極配合和緊密對接，助力NCO-48F項(xiàng)目取得更大進(jìn)展，造福人類生命健康。 關(guān)于博濟(jì)醫(yī)藥 臨床研究服務(wù)： 博濟(jì)醫(yī)藥擁有一支規(guī)模龐大、專業(yè)成熟的臨床研究隊(duì)伍，可提供包括醫(yī)學(xué)、項(xiàng)目管理、監(jiān)查、稽查、數(shù)據(jù)管理和統(tǒng)計(jì)分析、生物樣本檢測在內(nèi)的臨床試驗(yàn)全流程解決方案。截至2020年，博濟(jì)醫(yī)藥服務(wù)的客戶超1000家，完成800多項(xiàng)臨床試驗(yàn)項(xiàng)目，助力客戶獲得新藥證書60多項(xiàng)、生產(chǎn)批件超過80項(xiàng)。在有豐富的臨床試驗(yàn)服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，服務(wù)項(xiàng)目涵蓋臨床研究各個(gè)領(lǐng)域，在腫瘤、肝病、消化等創(chuàng)新藥領(lǐng)域擁有獨(dú)特的臨床服務(wù)體系。
2021-08-11
上周，“袁來如此”專欄根據(jù)已發(fā)表的文獻(xiàn)資料，對評估藥物臨床前PK/PD時(shí)，開發(fā)和選擇LBA方法的策略作初步介紹（袁來如此 | 大分子生物分析概論（十三_上）：臨床前LBA方法開發(fā)的策略）。本期將延續(xù)上期內(nèi)容，重點(diǎn)就ELISA方法在分析平臺間轉(zhuǎn)移、分析大數(shù)量樣本和儀器故障、實(shí)施樣本分析的最佳實(shí)踐三個(gè)具體問題進(jìn)行探討。“袁來如此”專欄系廣州博濟(jì)醫(yī)藥微信公眾號打造的科普學(xué)術(shù)專欄，內(nèi)容均為博濟(jì)醫(yī)藥藥物研究中心資深科學(xué)顧問袁智博士原創(chuàng)。分析方法的開發(fā) 支持藥物發(fā)現(xiàn)的生物分析部門是首次開發(fā)生物分析方法的地方，這是在準(zhǔn)備好分析方法進(jìn)行樣本分析之前，時(shí)間消耗最多的階段。 在開發(fā)分析方法時(shí)，需要考慮的主要要點(diǎn)是了解需要分析哪些樣本基質(zhì)、可用的樣本體積和所需的靈敏度。此外，基于參考研究，需要了解藥物在基質(zhì)中的預(yù)期濃度（expected matrix concentrations），以及分析具有多個(gè)給藥劑量的樣本所需的定量范圍。 在早期階段，大多數(shù)方法都以“符合其用途”（fit-for-purpose）為目標(biāo)，但隨著藥物項(xiàng)目的進(jìn)展，分析方法的嚴(yán)格/嚴(yán)謹(jǐn)程度會增加。方法開發(fā)的最低要求是篩選出最佳工作試劑（best working reagents）；確定最低要求的稀釋（minimum required dilution，MRD;用于PK樣本分析）或平行性范圍（對于PD；在替代基質(zhì)中制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線）；確定定量范圍，準(zhǔn)確度和精密度的要求。不清楚時(shí)，最好參考內(nèi)部指導(dǎo)文件和發(fā)表的文獻(xiàn)以開發(fā)最佳的方法，檢測平臺的選擇必須基于最終目標(biāo)和在該平臺上開發(fā)方法的容易程度。 此外，在某些情況下，需要測試該分析方法的耐受性，以及待測物的分子完整性，以相應(yīng)地開發(fā)相關(guān)分析方法。Tolerance評估 如果大分子藥物是針對血液循環(huán)中的可溶性配體，開發(fā)生物分析的主要挑戰(zhàn)是建立靶標(biāo)和藥物的耐受性測試（tolerance assays）。 針對可溶性配體的藥物可在樣本基質(zhì)中的產(chǎn)生多種分子物種（multiple molecular species）：游離的配體、結(jié)合的配體、游離的和結(jié)合的藥物。根據(jù)藥物開發(fā)階段和項(xiàng)目的需求，藥物開發(fā)團(tuán)隊(duì)可能對游離的，結(jié)合的，或總（游離+結(jié)合）的靶標(biāo)和藥物感興趣；因此，需要開發(fā)多種生物分析方法，以定量這些待測物（見擴(kuò)展閱讀#3）。找到適合每種測試的試劑對（reagent pair）， 并充分了解結(jié)合動力學(xué)和平衡（binding kinetics and equilibrium），對于達(dá)到最佳檢測性能是至關(guān)重要的。 值得注意的是，在測量靶標(biāo)或藥物的結(jié)合形式時(shí)，測試試劑可能會干擾結(jié)合的靶標(biāo)/藥物的某個(gè)部分（完全表位阻塞或立體阻礙/complete epitope blocking or steric hindrance），從而影響所測定的濃度。進(jìn)行tolerance assessments有助于選擇正確的試劑。此外，通過基于surface plasmon resonance（SPR）進(jìn)行表位映射（epitope mapping）研究，有助于在選擇試劑對（reagent pair）時(shí)做出明智的決策?；赟PR的實(shí)驗(yàn)研究，對于篩選具有非競爭表位的試劑，特別是在選擇對藥物或靶標(biāo)耐受的試劑的時(shí)候，可能是價(jià)值極高的。分子完整性 一些新穎的生物藥，如融合蛋白藥物，雙特異性和多特異性生物藥能夠提供更高的靶向選擇性和更長的血漿半衰期，但也存在更復(fù)雜的問題，如蛋白降解（proteolytic degradation），亞單元剪裁（subunit clipping），體內(nèi)脫酰胺（deamidation）或氧化（oxidation），可能會影響這些藥物的安全性和有效性。 詳細(xì)表征并定量不同的分子物種（molecular species）可以極大地有助于設(shè)計(jì)穩(wěn)定的藥物構(gòu)造（constructs）。 在這種情況下，僅靠免疫測定方法是不夠的。 需要其它正交（orthogonal）的生物分析方法，如Western blots，LC-高分辨率質(zhì)譜法（完整蛋白的/intact LC-MS或top-down LC-MS）和hybrid LBA/LC-MS（基于特征肽免疫親和性捕獲LC-MS/MS或bottom-up LC-MS），來回答與分子完整性相關(guān)的所有問題。 目前看來，免疫分析（Immunoassay）是這3個(gè)平臺中最靈敏的（如使用Simoa™平臺時(shí)），可以通過differential assays來評估配體構(gòu)象的完整性（conformational integrity），并在一定程度上，評估其功能完整性（functional integrity）。 Intact LC-MS可以提供基質(zhì)中不同分子物種相對豐度的綜合信息，但它的靈敏度較差。最近使用intact LC-MS，努力提高了單克隆抗體定量的靈敏度。然而，它們對融合蛋白等不太穩(wěn)定的分子的適用性尚在測試中。新一代的Orbitrap質(zhì)譜儀應(yīng)該有機(jī)會在完整蛋白定量方面提供更多可能。多肽LC-MS可以特異性地定量來自一個(gè)分子不同區(qū)域的多個(gè)肽段，但不能提供蛋白質(zhì)構(gòu)象的信息。因此，需要根據(jù)項(xiàng)目需要結(jié)合使用這些分析技術(shù)。若干問題的探討 限于篇幅，本文只探討3個(gè)議題，對其它相關(guān)問題感興趣的讀者請閱文末的參考文獻(xiàn)。將ELISA方法轉(zhuǎn)移到其它分析平臺 在開發(fā)臨床前LBA分析方法時(shí)，ELISA可能是首選的方法，因其簡單性，低成本，并且不需要專門的儀器設(shè)備。但是，如果ELISA方法不能滿足靈敏度和穩(wěn)健性要求時(shí)，特別是對GLP毒理/毒代研究而言，需要在一個(gè)CRO實(shí)施該研究時(shí)，往往需要將一個(gè)ELISA方法轉(zhuǎn)移到MSD或者GYROS平臺至上實(shí)施。MSD 從ELISA轉(zhuǎn)移到MSD平臺相對簡單；當(dāng)使用特定抗體對的ELISA方法無法到達(dá)所需要的靈敏度時(shí)，會經(jīng)常實(shí)施這樣的轉(zhuǎn)移來減少基質(zhì)效應(yīng)，提高靈敏度或增加定量動態(tài)范圍。然而，就像其它方法轉(zhuǎn)移一樣，試劑的差異和不同的修飾（modifications），如ruthenium或生物素標(biāo)記，可能會影響方法的效能。因此，雖然可以在MSD上重新使用已有的抗體對和測試格式，但將需要調(diào)整校準(zhǔn)品（Cs）和QCs的濃度，并充分驗(yàn)證新的方法。Gyrolab 在理想的情況下，需要小體積樣本或半自動化的分析方法應(yīng)當(dāng)直接在Gyrolab平臺上開發(fā)。如果一對抗體（antibody pair）可用于相同的捕獲-檢測組合，則將ELISA方法直接成功地轉(zhuǎn)移到Gyrolab上的可能性更大； 盡管可能需要重新優(yōu)化，以提高靈敏度和/或擴(kuò)展動態(tài)范圍。 重新優(yōu)化包括測試抗體對的組合；調(diào)整抗體濃度，以最大化靈敏度和動態(tài)范圍；測試選擇性，以盡量減少M(fèi)RD；以及重建動態(tài)范圍和QC水平。在轉(zhuǎn)移方法到Gyrolab平臺的時(shí)候，修改試劑，如使用生物素（biotin）或熒光標(biāo)記，也會影響測定性能。在任何情況下，都需要在此平臺實(shí)施完全的方法驗(yàn)證。 BIAcore BIAcore和ELISA之間的差異太大，不能直接轉(zhuǎn)移分析方法；因此，需要進(jìn)行方法的再開發(fā)，和全面的方法驗(yàn)證。 由于BIAcore是一個(gè)基于流體的系統(tǒng)，因此不宜直接與基于固相（例如，微孔板）的免疫測試方法進(jìn)行比較。需要進(jìn)一步開發(fā)BIAcore方法，例如芯片的固定（immobilization）和再生條件，用于固定和再生緩沖液的試劑，試劑的穩(wěn)定性，確定標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)量控制樣品，以及配體結(jié)合測試（LBA）方法的其他方面。 Luminex 如果以Luminex格式定量單個(gè)待測物，則從ELISA格式的方法轉(zhuǎn)移在測試方法的布局方面非常簡單，盡管需要制備，評估和驗(yàn)證新的試劑（例如，dye-coated beads，熒光標(biāo)記的檢測抗體）。有時(shí)，在洗滌步驟中需要額外的微孔板（真空或磁珠板）。如果需要將多個(gè)ELISA方法組合并轉(zhuǎn)移到一個(gè)Luminex方法（由于其multiplexing功能），則需要進(jìn)行額外的研究；并且，優(yōu)化方法參數(shù)可能需要更多的方法開發(fā)時(shí)間?？傮w而言，必須全面驗(yàn)證單通路和multiplex格式的Luminex方法；ELISA方法中使用的條件有助于確定開發(fā)Luminex方法的格式和抗體對。 分析大數(shù)量樣本和儀器故障MSD 對于在MSD上的樣本分析，校準(zhǔn)品（Cs）和QCs的位置通常與ELISA的位置相同。另一方面，值得注意的是：對微孔板一次只讀取四個(gè)孔的數(shù)據(jù)，而且在施加電壓后只能讀取一次。因此，如果發(fā)生儀器故障，可能無法測定整個(gè)校準(zhǔn)曲線；或者取決于微孔板設(shè)置（plate set-up），可能缺少一組QC的一部分，這通常發(fā)生在水平設(shè)置（horizontal set-up）中。對于垂直設(shè)置（vertical set-up），更有可能獲得校準(zhǔn)品和第1組QC，而不是第二組QC。在這兩種情況下，將需要重新讀取整個(gè)微孔板。如果儀器發(fā)生故障，而且讀數(shù)緩沖液已添加到微孔板中，則可能需要重新分析（re-assay）樣品，因?yàn)闄z測信號會隨時(shí)間顯著地減少。Gyrolab 通常，一個(gè)分析運(yùn)行被定義為一個(gè)CD，在每個(gè)CD上都放置有校準(zhǔn)品和 QCs。如果放置在不同CDs上的QCs的精密度和偏差符合接受標(biāo)準(zhǔn)，則在無人值守的運(yùn)行中處理的最多五張CDs的系列可以定義為一個(gè)單次運(yùn)行。 這需要測試和評估一個(gè)給定的格式是否滿足上述接受標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)檫@取決于能否快速捕獲待測物的和試劑的穩(wěn)定性。 需要將接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用于每個(gè)CD，這意味著具有失敗的QCs和/或失敗校準(zhǔn)曲線的CDs會被拒絕，而來自同一個(gè)多個(gè)CD運(yùn)行中的其它CDs可以通過。如果含多個(gè)CD的運(yùn)行僅有一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，并且此曲線不符合接受條件，則此多個(gè)CD的運(yùn)行的所有數(shù)據(jù)將被拒絕。由于多個(gè)CD運(yùn)行的風(fēng)險(xiǎn)，故應(yīng)在方法驗(yàn)證時(shí)，需要對樣品分析時(shí)的校準(zhǔn)曲線和QCs設(shè)置進(jìn)行評估。在任何情況下，每個(gè)CD都必須含有QCs。 如果在運(yùn)行過程中懷疑針頭故障，例如，觀察到結(jié)構(gòu)之間（inter-structure）高的CVs，則需要使用供應(yīng)商提供的儀器日常維護(hù)測試方法，測試液體處理裝置的性能。故可以識別不符合接受標(biāo)準(zhǔn)的樣本，校準(zhǔn)品或QCs所使用的針頭，并可以在未來的運(yùn)行中重新分析。液體處理裝置有10個(gè)針頭，分析數(shù)據(jù)指明了用于轉(zhuǎn)移某一樣本的針頭。 一些較新的LBA分析平臺，包括Gyrolab，提供比ELISA更寬泛的動態(tài)范圍。盡管如此，仍建議使用相同數(shù)量的校準(zhǔn)品和 QCs（在每個(gè)CD/微孔板的每個(gè)QC級別重復(fù)兩次）進(jìn)行驗(yàn)證（LLOQ，LQC，MQC，HQC，ULOQ）和樣品分析（LQC，MQC，HQC），如同對ELISA方法建議的那樣。Luminex 常見的做法是設(shè)置板中（in-plate）校準(zhǔn)品，并重復(fù)（duplicate）分析校準(zhǔn)品和樣本。校準(zhǔn)品的范圍通常比 ELISA的范圍更寬，以適應(yīng)各種待測物濃度，并確定每個(gè)待測物的校準(zhǔn)曲線和QCs響應(yīng)。值得指出，對于另一種待測物，校準(zhǔn)曲線上的錨定點(diǎn)可能不一樣。 如果儀器在運(yùn)行中失?。矗a(chǎn)生一個(gè)部分運(yùn)行partial run），只要相關(guān)校準(zhǔn)品和QCs成功完成且可以接受，則仍然可以使用已分析樣本的數(shù)據(jù)。與某些順序測定平臺（sequential platforms）相比，這不太令人擔(dān)心；而在那些順序平臺上，只有有限的QCs位于相對較大量的樣本之間；這樣的話，就可能沒有足夠的QCs來判斷許多樣本分析的結(jié)果是否有效。BIAcore 該平臺與RIA一樣，系列式地（in series）分析樣品，并使用微孔板加載樣本。因此，有兩種方法可以運(yùn)行 BIAcore 樣本分析。與 ELISA一樣，按96孔，設(shè)置校準(zhǔn)品和QCs；或者將兩個(gè)板（或更多）可以作為一個(gè)整體來運(yùn)行：在開始時(shí)，分析校準(zhǔn)品，并且在整個(gè)樣本分析中穿插幾組QCs。產(chǎn)生部分運(yùn)行結(jié)果的原因，可能是由于儀器故障；也可能是由于未知原因?qū)е翾C失敗。應(yīng)根據(jù)發(fā)生的情況和時(shí)間處理儀器故障。在由于未知原因?qū)е翾C失敗的情況下，當(dāng)兩組已接受的QCs之間的所有樣本都需要重新分析時(shí)，可以使用bracket approach，如表3所示。表3. Biacore樣本分析設(shè)置 總體而言，如果40%或更多個(gè)QC失敗，則必須重新分析，在可接受的最后一組QC之后的，所有樣本。只有在運(yùn)行開始時(shí)的一組QC都通過了的情況下，才能接受第一組樣本的分析結(jié)果。如果QC的成功和失敗是零星的（sporadic），則整個(gè)樣本分析運(yùn)行失敗，必須進(jìn)行原因調(diào)查。RIA使用類似的方法，系列式地分析一組試管。實(shí)施樣本分析的最佳實(shí)踐 1.在方法開發(fā)的過程中，最好消除殘留（carry-over），而不是在樣本分析中加以計(jì)算校正。 2.對于每個(gè)平臺，應(yīng)使用短期穩(wěn)定性數(shù)據(jù)來確定每次運(yùn)行的持續(xù)時(shí)間，以確保樣本穩(wěn)定性。 3.一個(gè)分析運(yùn)行不限于96個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)（校準(zhǔn)品加樣本）；例如，對于基于不同硬件支持，如CD和/或系列運(yùn)行[run in series]，如RIA，BIAcore，Erenna®，和 Gyrolab的平臺。 4.在分析運(yùn)行開始時(shí)，首先分析標(biāo)（校）準(zhǔn)曲線；之后，以合理的頻率在運(yùn)行中間隔地分析QCs，以驗(yàn)證該分析平臺上的結(jié)果。取決于如何定義一個(gè)分析運(yùn)行，可以在每個(gè)固體支持（solid support）上設(shè)置校準(zhǔn)品，也可以設(shè)置在一個(gè)微孔板/CD上；之后是QCs間隔的一系列樣本。無論一個(gè)分析運(yùn)行是如何定義的，應(yīng)當(dāng)有規(guī)律地多次分析QCs，以確認(rèn)運(yùn)行內(nèi)的精密度。 5.只要在方法驗(yàn)證期間確定的%CV在可接受的范圍內(nèi)，例如，小于或等于目前能夠接受的15%（對小分子而言），則可以進(jìn)行單個(gè)樣品分析，并采用最嚴(yán)格的接受標(biāo)準(zhǔn)。如果運(yùn)行超過多個(gè)固體支持，則%CV標(biāo)準(zhǔn)指的是重復(fù)（duplicate）運(yùn)行的QCs，和包括多個(gè)固體支持的運(yùn)行內(nèi)精密度。 6.對于方法轉(zhuǎn)移，在更改分析方法的平臺或格式時(shí)，大多數(shù)平臺需要重新驗(yàn)證；即便是部分驗(yàn)證也可能錯(cuò)過對一些關(guān)鍵參數(shù)的評估。因此，建議對樣本分析方法進(jìn)行完整的重新驗(yàn)證。 7.Multiplexing：建議盡可能在待測物的混合物中，驗(yàn)證每一個(gè)待測物。在樣本分析期間，如果一個(gè)待測物的分析失敗，則應(yīng)重新分析所有樣本，并屏蔽先前合格待測物的分析結(jié)果?？偨Y(jié)與前瞻 總之，大多數(shù)藥物發(fā)現(xiàn)階段的PK/PD免疫分析可以在MSD或Gyrolab平臺上進(jìn)行。Gyrolab還具有運(yùn)行時(shí)間短，樣本體積小和自動化，等附加優(yōu)勢，因此對臨床前生物分析極具吸引力。無論分析平臺如何，本文強(qiáng)烈建議，在最終所需分析方法的同一平臺上，篩選試劑和評估方法的性能。在另一方面，超高靈敏度和multiplexing平臺是特殊的應(yīng)用平臺，通常不能對試劑進(jìn)行高通量篩選。因此，可以首先在ELISA，MSD，Gyrolab或BIAcore（SPR技術(shù)）平臺上對試劑進(jìn)行篩選，然后在相關(guān)特殊平臺上優(yōu)化并最終建立相關(guān)方法。Simoa™平臺因其超高靈敏度（可以使用微量樣本體積）和自動化操作，在相當(dāng)?shù)某潭壬峡梢蕴娲鶪yrolab平臺，用于臨床前PK樣本分析。 針對可溶性靶標(biāo)的新藥項(xiàng)目，需要在方法開發(fā)的開始，就利用BIAcore平臺使用的SPR技術(shù)來克服耐受性（tolerance）問題。選擇分析平臺時(shí)，應(yīng)當(dāng)牢記最終目標(biāo)。雖然獲得完美的方法參數(shù)是最理想的，但就檢測方法的局限性和項(xiàng)目需求而言，需要切合實(shí)際；因此，需要有愿意在使用的樣本體積或分析運(yùn)行的時(shí)間，等參數(shù)上，做出妥協(xié)，以滿足整體需求。與項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)良好的溝通有助于確定相關(guān)工作的優(yōu)先級別，滿足對分析方法的需求并滿足相關(guān)時(shí)間表。當(dāng)項(xiàng)目的目標(biāo)預(yù)期發(fā)生變化時(shí)，需要對分析方法的格式保持足夠的靈活性，以便在不同的分析平臺之間，輕松地轉(zhuǎn)移分析方法。 每個(gè)平臺在檢測試劑，如Sulfo-tag、horseradish peroxidase（HRP或其他酶）方面，差異最大。因此，試劑的生物素化（biotinylation），當(dāng)與各自對應(yīng)的鏈球菌蛋白標(biāo)記的試劑（streptavidin-tagged reagents）一起使用時(shí)，可以實(shí)現(xiàn)分析方法在這些平臺之間的無縫轉(zhuǎn)移。在需要將捕獲試劑生物素化的平臺（Gyrolab）上，這些生物素化的試劑可以作為捕獲（capture）使用。無論是分析針對可溶性靶標(biāo)的藥物的游離的，還是結(jié)合的百分比，或是分析復(fù)雜分子的分子完整性，都應(yīng)當(dāng)利用免疫測試方法的多功能性（versatility），并相應(yīng)地考慮合適的分析平臺。雖然免疫分析領(lǐng)域正在迅速發(fā)展，但LC-MS等正交性生物分析平臺也在平行地發(fā)展，有時(shí)可以作為免疫分析方法的補(bǔ)充。因此，充分了解正交分析平臺，并及時(shí)向這些平臺的團(tuán)隊(duì)提示研究方向，將有助于項(xiàng)目的成功。后續(xù)文章將介紹相關(guān)進(jìn)展，敬請關(guān)注。特別聲明 本文如有疏漏和誤讀相關(guān)指南和數(shù)據(jù)的地方，請讀者評論和指正。所有引用的原始信息和資料均來自已經(jīng)發(fā)表學(xué)術(shù)期刊、官方網(wǎng)絡(luò)報(bào)道等公開渠道, 不涉及任何保密信息。 參考文獻(xiàn)的選擇考慮到多樣化但也不可能完備。歡迎讀者提供有價(jià)值的文獻(xiàn)及其評估。 參 考 文 獻(xiàn)1. 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2021-08-10
