公司新聞
北美時間8月20日，由濱會生物研發(fā)的抗腫瘤創(chuàng)新藥BS001（OH2）注射液獲得美國FDA許可，將在美國開展針對多種實體瘤的臨床試驗。博濟醫(yī)藥子公司美國漢佛萊助力該項目在美國FDA的IND申報工作。 據(jù)悉，BS001注射液是全球第一個選擇Ⅱ型單純皰疹病毒（HSV2）作為載體，并且進入臨床研究的溶瘤病毒藥物，也是中國第一個具有完全自主知識產(chǎn)權的新型溶瘤病毒株，首次登上溶瘤病毒免疫治療的世界舞臺。 濱會生物創(chuàng)始人、CEO劉濱磊博士表示，獲準在美開展臨床試驗是BS001注射液邁出的穩(wěn)健而堅定的一步，開啟了創(chuàng)新藥研發(fā)的新里程。它標志著濱會生物從溶瘤病毒體系創(chuàng)新研究、病毒基因改造、規(guī)模生產(chǎn)到臨床已形成全方位的閉環(huán)。而這個閉環(huán)下的產(chǎn)品開發(fā)質(zhì)量和安全性得到了國際高標準的認可，這既是濱會生物打造產(chǎn)學研一體化平臺的重大里程碑事件，也是中國溶瘤病毒免疫治療走向世界的新突破。 在濱會生物首席醫(yī)學官（CMO）王漢明看來，BS001注射液于2018年獲得NMPA批準IND，已相繼在20余家醫(yī)院開展了針對多種實體瘤的臨床試驗，安全性和有效性得到了充分驗證。此次BS001注射液獲得FDA IND許可，同時在美國進行研究開發(fā)，我們將充分發(fā)揮自身的CMC實力，加速創(chuàng)新產(chǎn)品上市，為全球腫瘤患者提供更先進、更多樣、更安全有效的治療方案。 作為CRO合作方，美國漢佛萊相關負責人對濱會生物獲批美國FDA臨床試驗許可表示衷心祝賀，感謝濱會生物自始至終的理解與信任!未來，美國漢佛萊將繼續(xù)深耕于中美雙報領域，助力中國藥企國際化發(fā)展，造福人類生命健康。關于博濟醫(yī)藥 臨床研究服務： 博濟醫(yī)藥擁有一支規(guī)模龐大、專業(yè)成熟的臨床研究隊伍，可提供包括醫(yī)學、項目管理、監(jiān)查、稽查、數(shù)據(jù)管理和統(tǒng)計分析、生物樣本檢測在內(nèi)的臨床試驗全流程解決方案。截至2020年，博濟醫(yī)藥服務的客戶超1000家，完成800多項臨床試驗項目，助力客戶獲得新藥證書60多項、生產(chǎn)批件超過80項。在有豐富的臨床試驗服務經(jīng)驗，服務項目涵蓋臨床研究各個領域，在腫瘤、肝病、消化等創(chuàng)新藥領域擁有獨特的臨床服務體系。博濟醫(yī)藥在全國設有40多個臨床監(jiān)查網(wǎng)點，與全國近600個臨床試驗機構(gòu)展開合作，并運用ORACLE OC/RDC及CTMS系統(tǒng)，控制臨床數(shù)據(jù)采集的及時性、管理臨床試驗過程的規(guī)范性。
2021-08-23
?近日，博濟醫(yī)藥子公司蘇州旭輝檢測有限公司（下稱旭輝檢測）正式通過中國合格評定國家認可委員會（CNAS）認可評審，獲得CNAS實驗室認可證書（證書注冊號：CNAS L15203）。這標志著旭輝檢測的實驗室具備了國家及國際認可的管理水平、檢測環(huán)境和檢測技術。 認可證書 據(jù)悉，中國合格評定國家認可委員會（China National Accreditation Service for Conformity Assessment）是由國家認證認可監(jiān)督管理委員會批準設立并授權的國家認可機構(gòu)，統(tǒng)一負責對認證機構(gòu)、實驗室和檢查機構(gòu)等相關機構(gòu)的認可工作。通過CNAS實驗室認可、出具的認可能力范圍內(nèi)的數(shù)據(jù)測試報告具有權威性和公信力。 旭輝檢測于去年9月份開始申報CNAS實驗室認可，經(jīng)過實驗室全體員工的不懈努力，于今年6月份成功通過CNAS現(xiàn)場審查，并得到了審查老師的高度認可，CNAS實驗室認可資格已于2021年8月4日獲正式批準。 近年來，旭輝檢測在檢測分析領域努力探索，持續(xù)引進先進的檢測儀器設備。此次CNAS認證的通過將進一步提升旭輝檢測在檢測分析領域的地位和客戶認可度。關于旭輝： 蘇州旭輝檢測有限公司位于江蘇省昆山市小核酸基地產(chǎn)業(yè)園，由業(yè)內(nèi)知名上市公司及分析領域資深專業(yè)人士投資建立，現(xiàn)有員工50余人，主要從事臨床生物樣品檢測分析服務（包括化學創(chuàng)新藥物藥代動力學研究和仿制藥一致性評價/生物等效性研究）、基于DMPK的藥物篩選研究以及IND申報的DMPK研究服務。 旭輝檢測自建立以來，已申報仿制藥生物等效性試驗項目近40個，其中13個品種已順利通過核查，8個品種成功拿到藥品補充申請批準。旭輝檢測積極的進行外部質(zhì)量監(jiān)控，已連續(xù)3年滿分通過全國藥代動力學實驗室室間質(zhì)量評價并通過2019年度中國食品藥品檢定研究院的能力驗證。 關于博濟醫(yī)藥 臨床研究服務： 博濟醫(yī)藥擁有一支規(guī)模龐大、專業(yè)成熟的臨床研究隊伍，可提供包括醫(yī)學、項目管理、監(jiān)查、稽查、數(shù)據(jù)管理和統(tǒng)計分析、生物樣本檢測在內(nèi)的臨床試驗全流程解決方案。截至2020年，博濟醫(yī)藥服務的客戶超1000家，完成800多項臨床試驗項目，助力客戶獲得新藥證書60多項、生產(chǎn)批件超過80項。擁有豐富的臨床試驗服務經(jīng)驗，服務項目涵蓋臨床研究各個領域，在腫瘤、肝病、消化等創(chuàng)新藥領域擁有獨特的臨床服務體系。 博濟醫(yī)藥在全國設有40多個臨床監(jiān)查網(wǎng)點，與全國近600個臨床試驗機構(gòu)展開合作，并運用ORACLE OC/RDC及CTMS系統(tǒng)，控制臨床數(shù)據(jù)采集的及時性、管理臨床試驗過程的規(guī)范性。
2021-08-17
本文為系列文章《大分子生物分析概論》的第十四篇，旨在根據(jù)已發(fā)表的文獻資料，初步的介紹定量分析雙特異性抗體的LBA方法所面臨的挑戰(zhàn)。 由于內(nèi)容篇幅較長，本文將采取上下篇形式進行推送，敬請垂注！《袁來如此》專欄系廣州博濟醫(yī)藥微信公眾號打造的科普學術專欄，內(nèi)容均為博濟醫(yī)藥藥物研究中心資深科學顧問袁智博士原創(chuàng)。 與傳統(tǒng)（單特異性）的生物藥相比，雙特異性生物藥對其藥代動力學（PK）的表征提出了獨特的挑戰(zhàn)。在此背景下，開發(fā)生物藥的生物分析策略正在迅速演變，以支持這些不斷變化的藥物模式。 一般說來，生物分析策略應根據(jù)藥物的作用機制（mechanism of action，MOA）和開發(fā)階段定制。對于 mAb 藥物，用于分析藥代/毒代動力學（PK/TK），藥效動力學和免疫原性的分析方法通常分別為定量分析、“游離”和“總”藥物濃度、“游離”和“總”靶標濃度、抗藥物抗體（ADAs）和中和性 ADAs的開發(fā)和驗證。對于具有復雜結(jié)構(gòu)的抗體衍生物（antibody derivatives），衍生物的每個功能域可能需要額外的一組檢測方法，從而可能導致測試方法的數(shù)量幾何級增長。 此外，與開發(fā)默認沒有生物轉(zhuǎn)化（biotransformation）的mAb相比，復雜的抗體衍生物更容易發(fā)生生物轉(zhuǎn)化，這意味著可能需要另一組測試方法來描述復雜抗體藥物的結(jié)構(gòu)完整性及其生物轉(zhuǎn)化后的各種產(chǎn)物（biotransformed variants）。 配體結(jié)合式測試方法（LBA）是mAbs生物分析的主力軍，同時液相色譜-質(zhì)譜方法（LC-MS）也在近年越來越受歡迎。這兩種分析技術也主要應用于抗體藥物及其衍生物的生物分析。 由于藥物模式的復雜性，通常需要多個 LBA/LC-MS 分析方法。當每個分析方法都有特定的取樣程序，而且并非所有的檢測可以在一個生物分析實驗室實施時，獨特的樣本采集、處理、儲存、運輸和分析條件，會造成復雜的后勤需求。因此，需要設計一種生物分析策略，用于表征雙特異性分子的PK特性，并研究其體內(nèi)結(jié)構(gòu)-功能關系。本文提供了若干相關案例研究和監(jiān)管層面的預測。導論 近年來，蛋白質(zhì)工程和生產(chǎn)方面的進展推動著生物制藥行業(yè)開發(fā)越來越復雜的蛋白質(zhì)藥物，其能夠結(jié)合多個藥物治療靶標，故能夠提高療效和/或者減少劑量，用以降低毒性，使安全風險最小化，提高用藥的方便性和依從性等。雙特異性藥物被定義為基于抗體（antibody-based）或基于框架（scaffold-based）的蛋白質(zhì)藥物，其包含一個以上的工程改造功能區(qū)域，該功能區(qū)域結(jié)合兩個或多個獨立的抗原靶點。本文集中關注雙特異性藥物的兩個獨特的功能域，其結(jié)合與疾病的發(fā)生和進展相關的蛋白質(zhì)，而不考慮抗體骨（主）干（antibody backbone）的功能。 開發(fā)雙特異性生物藥的領域，基于并發(fā)展了傳統(tǒng)的單分子靶點的抗體免疫療法的框架，正在蓬勃發(fā)展，以靶向協(xié)同的分子途徑（target synergistic molecular pathways）來更有效地治療疾病。兩種雙特異性抗體，blinatumomab（Blincyto）和catumaxomab（Removab）已經(jīng)在美國或歐盟批準上市，用于腫瘤適應癥的治療；這證明了這類藥物分子的應用價值。目前有60多種用于癌癥和其它疾病的新型雙特異性生物藥正在臨床開發(fā)之中。雙特異性生物藥分子 雙特異性分子可以以各種不同的結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)，利用抗體可用的各種結(jié)合域。這些結(jié)合域包括可變重鏈(VH)、可變輕鏈(VL)、單鏈分子(ScFv)和/或抗體的Fc域，可以組合使用這些結(jié)構(gòu)域，以結(jié)合多個分子靶標。具有多個Fab結(jié)合域的雙可變域免疫球蛋白(dual-variable domain immunoglobulin，DVD -Ig)這樣的大型免疫球蛋白分子和較小的串聯(lián)ScFv結(jié)構(gòu)域(diabody)，在分子大小和結(jié)構(gòu)上代表了兩個極端，它們都可通過各種蛋白質(zhì)工程技術生產(chǎn)出來(圖1)。 圖1. 雙特異性分子的構(gòu)造。本圖展示了三個雙特異性抗體的例子：1. Hetero-lg；2.雙可變結(jié)構(gòu)域/dual variable domain；3.antibody-peptibody；這些代表了不同的分子大小，結(jié)構(gòu)及復雜性。 目前的技術允許蛋白質(zhì)結(jié)合域（protein binding domains）和抗體支架（antibody scaffolding）的多種組合，形成一系列獨特的藥物模式（drug modalities）。雙特異性藥物的幾個功能類別包括：與可溶性靶標結(jié)合以抑制或刺激相關功能、與細胞靶標結(jié)合以拮抗或刺激相關功能、與細胞靶標結(jié)合以招募免疫細胞以促進抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)功能。 對雙特異性分子獨特的結(jié)構(gòu)和作用機制(MOA)給藥代動力學和藥理學(PK/PD)評估，體內(nèi)結(jié)構(gòu)-功能關系的確定以及臨床前和臨床藥物開發(fā)階段所需的生物分析支持帶來了新的挑戰(zhàn)。雙特異性抗體 雙特異性抗體是通過基因工程重組生產(chǎn)的抗體，由兩個不同的結(jié)合域（two distinct binding domains）組成，能夠結(jié)合兩種不同的抗原或同一抗原的兩個不同表位。它們可以分為兩個主要類別，即帶有或缺少Fc區(qū)域的兩類。關于生物分析支持， FDA關于雙特異性抗體開發(fā)的指南指出：可能需要開發(fā)多種PK定量方法，以定量總（total），結(jié)合（bound）和未結(jié)合（unbound）的雙特異性抗體的濃度；也可能需要多個免疫原性測試方法，來測試對雙特異性抗體不同結(jié)構(gòu)域的免疫反應。 由于雙特異的性質(zhì)，雙特異性抗體的未結(jié)合或“游離”PK定量方法可以包括三個測定方法：一個雙功能方法同時測定兩個活性結(jié)合域（active binding domains）和兩個單功能方法分別測定二個結(jié)合域中之一。雙功能方法分別使用兩個靶標蛋白作為捕獲和檢測試劑。單功能方法使用一個靶標蛋白作為捕獲試劑，而使用抗人類IgG作為檢測試劑。通常，在解釋檢測結(jié)果時應謹慎，因為單特異性方法缺乏特異性，故也能檢測到雙功能分子。 雙特異性抗體的定量PK分析方法面臨生物轉(zhuǎn)化（biotransformation）的重大挑戰(zhàn)，因此，通常定制開發(fā)方法以定量某個功能域生物轉(zhuǎn)化的程度。獨特的雙特異性構(gòu)造可能造成意外的生物轉(zhuǎn)化路徑，并可能使PK行為復雜化。雙特異性生物藥的PK/PD 雙特異性分子增加了PK建模的復雜性，例如，表征靶向介導的藥物處置需要考慮兩個靶點的表達，它們以不同的頻率出現(xiàn)在不同的細胞類型上。“游離”藥物濃度與“總”藥物濃度的定量，對于PK/PD建模至關重要，特別是當涉及可溶性靶點時；但是，由于靶標蛋白在體內(nèi)的不同表達模式（expression patterns），藥物定量分析可能會變得更加復雜。在絕大多數(shù)的臨床研究中，藥物濃度是在所謂的“中央隔室central compartment”或系統(tǒng)循環(huán)（systemic circulation）中，以血漿或血清樣本的形式，測定的，這在很大程度上是由于易于從服用藥物的受試者中取樣。根據(jù)幾十年累積的科學數(shù)據(jù)，系統(tǒng)藥物濃度（systemic drug concentrations）反映了藥物在靶標作用部位的濃度。血液病是一個例外，但即使是血液病也通常含有固體組織的部分。系統(tǒng)藥物濃度和作用地點（site-of-action）的藥物濃度之間的關系會因作用地點的不同而不同，但適當?shù)膭游锬Ｐ蛿?shù)據(jù)通常為人體狀況提供了可靠的模型。 由于藥理學或藥效學響應依賴于全身藥物濃度，正確理解PK-PD關系對于預測達到預期響應的劑量和暴露量極為有用。同樣重要的是，確定可能發(fā)生在每個獨特的雙特異性分子上的任何潛在的體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化（in vivo biotransformation），并徹底表征不同的藥物在暴露量和活性方面的差異?？傮w來說，這些表征有助于理解藥物的暴露量-響應關系，并提供了，基于藥物變構(gòu)體活性，優(yōu)化劑量設計方案。 PK評估是非臨床毒理學研究和臨床開發(fā)的必然需求，在非臨床疾病模型評估中也發(fā)揮著重要作用；一般在非臨床疾病模型評估中，研究藥物劑量-響應的特性，用以選擇先導藥物。非臨床毒理學研究中的全身暴露量數(shù)據(jù)，可用于確定首次對人(FIH)研究的安全起始劑量，該起始劑量是基于此類安全研究確定的暴露量余量（exposure margin）。暴露量余量由未觀察到不良反應水平(NOAEL)的動物暴露量與選定人體劑量的預期暴露量的比值確定，通常設定為比NOAEL預期的人體等效劑量(HED)低10倍。由于雙特異性分子可靶向多種生理或病理途徑，因而可能具有更強的藥理和/或毒理學作用；故監(jiān)管機構(gòu)可能要求制藥商使用“最低預期生物效應水平”（MABEL）模型來選擇FIH劑量,這意味著需要比基于NOAEL更低的起始劑量。臨床研究中較低的起始劑量，意味著可能需要提高PK方法的靈敏度；考慮到雙特異性分子的復雜性，這可能是一個挑戰(zhàn)。 PK定量分析方法 為了支持符合藥物預期用途的PK數(shù)據(jù)的可靠性和有效性，監(jiān)管機構(gòu)希望制藥商，對所有的GLP研究/關鍵臨床試驗，使用經(jīng)過驗證的分析方法來定量藥物濃度。監(jiān)管部門為生物分析方法的驗證提供了具體的指南，這些指南在全球各監(jiān)管機構(gòu)中普遍一致。這些指南文件清楚地闡明了對分析方法參數(shù)的性能及其可接受值的監(jiān)管期望，包括收集，儲存和分析過程中研究樣本的完整性。關于檢測試劑的討論，特別是捕獲和檢測試劑的選擇，分析格式和技術平臺，以及用于PK表征和PK/PD相關性分析的相關待測物，都可以在科學文獻中找到。對于靶標在血液循環(huán)中的藥物（這些靶標可在血清或血漿樣本中形成藥物-靶標復合物），關于應當測定的最相關的藥物形式(不包括生物轉(zhuǎn)化物/ biotransformants)仍然存在爭議:“總體”(結(jié)合了 + 未結(jié)合靶標的藥物)或“游離部分”或“活性部分”(未結(jié)合靶標的部分)。關于總藥物濃度和游離藥物濃度的問題最好根據(jù)靶標的已知狀況，藥物的MOA和特征，項目團隊的意見，技術可行性，以及監(jiān)管反饋（如果需要的話），按個案處理的原則解決。最近有文獻討論了相關問題。LBA定量方法 生物分析策略的選擇可以根據(jù)藥物特定的開發(fā)階段而有所不同。例如,在非臨床物種中研究人類蛋白藥物, 使用不與非人類物種交叉反應的，針對人類蛋白的試劑，特別是非人靈長類同源物，例如,重組人源化單克隆抗體（recombinant humanized monoclonal antibody，rhuMabs）,可以開發(fā)一種通用的，快速且經(jīng)濟的PK分析方法來測定總藥物濃度，以支持全面的毒理學評價。然而,這種方法不能用在臨床研究中,更加藥物特異性試劑，例如，靶標抗體和anti-idiotypic抗體，更可能是必要的：使用通用試劑與內(nèi)源性分子發(fā)生交叉反應會干擾蛋白藥物濃度的定量，而測定游離藥物的濃度與建立PK-PD關系息息相關。非臨床和臨床生物分析策略的另一個問題是，使用針對每個靶標結(jié)合位點（target binding site）的試劑，例如針對每個靶標結(jié)合域的靶標和/或anti-idiotypic抗體的組合，來測定完整的雙特異性分子是否最有價值。Anti-idiotypic 抗體 當一種抗體與另一種抗體的idiotope結(jié)合時，它被稱為抗idiotope抗體?？贵w的可變部分，包括獨特的抗原結(jié)合位點，被稱為idiotope。Idiotopes內(nèi)的表位組合對于每種抗體都是獨一無二的(圖2).由于目前開發(fā)的大多數(shù)單克隆抗體藥物是人源的或人源化的，因此最可能誘導抗藥物抗體（ADA）的免疫原性表位（immunogenic epitopes），存在于提供大多數(shù)結(jié)合接觸面（binding contacts）的hypervariable complementarity determining regions（CDR）之內(nèi)。可以生成抗idiotypic抗體，特異性地結(jié)合一個單克隆抗體藥物。這些高度特異性的抗體可用于，以不同測試格式，開發(fā)藥代動力學（PK）定量方法，以測定臨床前和臨床樣本中的游離藥或總藥物的濃度，或在ADA測試中作為陽性對照等。圖2. 抗體idiotope：抗體可變區(qū)域的，獨特的抗原決定因素（antigenic determinants）的集合。 在這方面，藥物的MOA在選擇合適的分析方法時很重要，特別是在藥物活性依賴于雙特異性藥物對兩個靶點的同時作用的情況下。抗CD3/抗腫瘤靶標雙特異性藥物就是一個例子：測定完整的，有活性的雙特異性分子是充分表征該藥物的最佳策略。反之，如果藥物活性依賴于一個靶點的參與，而另一個靶點的參與只是增強了藥物活性, 那么，測定完整藥物可能就不那么重要了；此時，只使用一種藥物特異性試劑 (例如，單臂靶向/1-arm target，單臂/1-arm延長 PK或增加暴露量) 可能是合理的策略。另一種方法的一個例子是評估catumaxomab抗體的PK: 該PK分析方法利用了該抗體藥物是小鼠/大鼠的嵌合結(jié)構(gòu)體，使用了特異性的antispecies immunoglobulin的捕獲/檢測試劑。這里，使用了一個針對藥物的嵌合結(jié)構(gòu)的混合通用分析格式（mixed generic assay format）；該方法特異性來自嵌合結(jié)構(gòu)，而不涉及CDRs。這種方法基于兩個假設: 首先，單克隆抗體(mAb)藥物在體內(nèi)通常非常穩(wěn)定。其次，靶標蛋白沒有可檢測到的可溶性形式。因此，該PK分析方法可以測定血液循環(huán)中游離的catumaxomab單抗，這是符合其預期用途的。一般來說，默認的生物分析策略是利用雙特異性藥物的雙特異性，但需要認識到開發(fā)這樣的試劑是耗時的和有挑戰(zhàn)的；并且可能在藥物發(fā)現(xiàn)甚至非臨床研究階段還沒有這樣的試劑。下面將更詳細地考量各種選擇。PK定量方法的設計完整雙特異性分子的分析方法 完整雙特異性分子定量的目的是測定生物基質(zhì)中完整的雙特異性分子。該測試只測定有活性雙特異性分子，其沒有任何功能區(qū)域被抗藥物抗體(ADA)或血液循環(huán)中的靶點切斷（clipped off）或阻斷（blocked）。完整分子的檢測方法通常需要使用靶標抗體和/或anti-idiotypic抗體，以測定包含可結(jié)合捕獲和檢測試劑這兩個功能域的分子。在評估體內(nèi)或體外穩(wěn)定性時(假設試劑可用)，建議采用完整分子的分析方法。完整分子定量的測試格式如圖3A所示。 這種測試格式使用兩個靶標分子或兩個完全中和性的anti-idiotypic抗體，或兩者的組合。最近， LC-MS，結(jié)合affinity pull-down（使用靶標或anti-idiotypic抗體）以分離待測物，已用于表征的生物基質(zhì)中的藥物完整分子。Affinity pull-down是一種類似于免疫沉淀（immunoprecipitation）的小規(guī)模親和純化技術，只是抗體也可以被其它親和系統(tǒng)所取代。 這是一種sequential方法：首先，使用anti-idotypic抗體來下拉（pull down）雙特異性藥物的游離形式；然后，用LC-MS法進行定量。利用這種形式，可以確定雙特異性分子的游離濃度。然而，在方法開發(fā)過程中需要考慮幾個關鍵因素: 該測試格式必須設計好，以避免潛在的空間位阻效應（steric hindrance）。一些雙特異性分子被設計為靶向一個可溶性分子和一個與細胞結(jié)合的分子(細胞表面受體)。這種雙特異性分子被明確設計為與兩個靶點同時相互作用，以發(fā)揮其預期的藥理活性。然而，雙特異性分子和檢測試劑在檢測環(huán)境中可能有不同的相互作用，換句話說，在塑料容器表面可能表現(xiàn)出不同的相互作用。因此，應該理解和謹慎的處理空間位阻效應。例如，從位阻效應研究中收集的數(shù)據(jù)，例如，在Octet平臺上考查域結(jié)合干擾（domain binding interferences）的數(shù)據(jù)，可能指向選擇一個特定的捕獲和檢測順序，以避免不必要的空間位阻效應; 一些雙特異性分子，通過協(xié)同作用，具有很高的藥效學效力（highly pharmacologically potent），這可能意味著只需要非常低的臨床劑量。因此, 基于已知的劑量-響應數(shù)據(jù)和劑量模型（dose modelling）的分析方法靈敏度將會是一個重要的考量指標; 與傳統(tǒng)的單特異性抗體相比，雙特異性分子更有可能出現(xiàn)體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化（biotransformation），即體內(nèi)不穩(wěn)定性（in vivo instability）。生物轉(zhuǎn)化不僅可能影響雙特異性分子的活性，而且還可能影響定量雙特異性分子的可靠性。因此，完全中和性，anti-idiotypic抗體或靶標分子(圖3A)有可能允許檢測潛在的生物轉(zhuǎn)化（consequential biotransformation）; 圖3. 用于定量雙特異性分子的不同測試格式和試劑。(A)完整分子的測定方法：使用靶標蛋白X和靶標蛋白Y作為檢測試劑，測定完整雙特異性分子的濃度。(B) 功能域分析：采用抗Fc抗體和靶標Y蛋白作為檢測試劑來測量功能域Y的濃度。(C)功能域分析：采用抗Fc抗體和X靶標蛋白作為檢測試劑來測量功能域X的濃度。(D)總濃度測定方法：通過使用兩種抗Fc抗體作為測試試劑來測定雙特異性分子的所有可溶形式。 與單特異性生物藥分子類似，如常規(guī)的單克隆抗體，ADA可以通過阻斷捕獲或檢測試劑與藥物的結(jié)合來干擾對雙特異性分子的定量(注意不要與改變的藥物清除率相混淆)。此外，一個結(jié)構(gòu)域可能是immunodominant；那么取決于測試格式，這可能會導致PK分析結(jié)果的差異。另外，也許除了內(nèi)源性的IgG4分子之外，雙特異性分子所固有的新穎，非天然結(jié)構(gòu)，可能使雙特異性分子比單特異性分子更容易誘發(fā)ADA反應，這是免疫原性風險評估的一個考慮因素。功能域分析（functional domain assay） 功能域分析是測定一個功能域的濃度，此格式可用于展示相關的單一功能域的濃度。當雙特異性的MOA使得藥物分子的一部分（a partial molecule）保留部分活性時(如可溶性靶標，融合蛋白，或肽激動劑)，這些檢測顯得尤為重要。功能域分析的目的是確定哪個功能域是有活性的，因此，可用于解釋與ADA的形成或生物轉(zhuǎn)化相關的功能喪失。 單域測試格式的設計如圖3B和3C所示。該方法特意使用藥物靶標，或抑制性anti-idiotypic抗體來分析雙特異性分子的游離結(jié)構(gòu)域（free domain）， 并與抗Fc或抗框架（anti-framework）抗體，作為捕獲或檢測試劑，聯(lián)用。這些分析方法可用于藥物開發(fā)的任何階段。有時，基于細胞的測試方法可以用于測量單個功能域，如blinatumomab情況。 圖3. 用于定量雙特異性分子的不同測試格式和試劑。(A)完整分子的測定方法：使用靶標蛋白X和靶標蛋白Y作為檢測試劑，測定完整雙特異性分子的濃度。(B) 功能域分析：采用抗Fc抗體和靶標Y蛋白作為檢測試劑來測量功能域Y的濃度。(C)功能域分析：采用抗Fc抗體和X靶標蛋白作為檢測試劑來測量功能域X的濃度。(D)總濃度測定方法：通過使用兩種抗Fc抗體作為測試試劑來測定雙特異性分子的所有可溶形式。總濃度分析方法（total assay） 總體測定法（total assay）用于測定雙特異性分子的所有可溶形式。這種測試格式可用于顯示雙特異性分子的存在，而不考慮任何結(jié)構(gòu)或功能的變化。該分析方法通常用于測定蛋白質(zhì)的主（骨）干（backbone）結(jié)構(gòu)，如Fc結(jié)構(gòu)域。但這可能并不適用于所有的構(gòu)造；取決于構(gòu)造的性質(zhì)，也不一定適用于所有的分子變構(gòu)體，例如，在臨床研究中rhuMab雙特異性藥物。總體測定法應當耐受ADA和與靶標的結(jié)合（target binding）。圖3D描述了總體測定法，其中兩個與不同表位結(jié)合的抗人Fc抗體可以用作捕獲和檢測試劑。 圖3. 用于定量雙特異性分子的不同測試格式和試劑。(A)完整分子的測定方法：使用靶標蛋白X和靶標蛋白Y作為檢測試劑，測定完整雙特異性分子的濃度。(B) 功能域分析：采用抗Fc抗體和靶標Y蛋白作為檢測試劑來測量功能域Y的濃度。(C)功能域分析：采用抗Fc抗體和X靶標蛋白作為檢測試劑來測量功能域X的濃度。(D)總濃度測定方法：通過使用兩種抗Fc抗體作為測試試劑來測定雙特異性分子的所有可溶形式。 同樣，單一多克隆抗人IgG試劑也可用作捕獲和檢測試劑。但此方法只用于非臨床研究。對于測量總體藥物濃度， LC-MS非常有用，特別是當沒有特定的試劑可用時?？傮w測定法可與“完整intact”或“有效active”藥物測定法，結(jié)合使用，或同時使用兩者，以評估體內(nèi)外（in vivo /ex vivo）的穩(wěn)定性，以及生物轉(zhuǎn)化（biotransformation）對結(jié)構(gòu)-功能關系的影響，例如，某些deamidation或氧化反應可能破壞藥物與靶標的結(jié)合。 PK樣本中生物環(huán)境的復雜性為使用哪一種定量方法增加了另一層挑戰(zhàn)。生物分析方法的應用是從藥物發(fā)現(xiàn)和臨床前安全性評估期間的動物研究開始的，持續(xù)到臨床開發(fā)，并延伸到上市后的生命周期管理(即附加適應癥和/或組合療法)。正如前面所指出的，不同的分析策略可以在不同的開發(fā)階段使用；當體內(nèi)結(jié)構(gòu)-功能關系確立之后，可以在藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)的整個過程中開發(fā)和使用單一的定量分析方法。但是，需要對分析方法的生命周期管理有特殊考慮，以便將來自多個物種和不同目標患者群體的PK/PD知識整合到所探索適應癥中去。雙特異性分子的方法驗證和認證（method validation & qualification） 對雙特異性分子的方法驗證和認證與其他大分子一樣，包括精密度和準確度，稀釋線性度，選擇性，干擾和特異性，以及穩(wěn)定性測試，以確保數(shù)據(jù)的穩(wěn)健性和完整性。然而，由于雙特異性分子的性質(zhì)，如上所述，在開發(fā)完整分子的分析方法時，對這兩個結(jié)構(gòu)域的特異性和分析干擾的評估都是必要的。特別聲明 本文如有疏漏和誤讀相關指南和數(shù)據(jù)的地方，請讀者評論和指正。所有引用的原始信息和資料均來自已經(jīng)發(fā)表學術期刊, 官方網(wǎng)絡報道, 等公開渠道, 不涉及任何保密信息。參考文獻的選擇考慮到多樣化但也不可能完備。歡迎讀者提供有價值的文獻及其評估。參考文獻1.Zhu, L, et al. 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2021-08-18
?昨天（8月12日），1類新藥銀杏內(nèi)酯B注射液項目I期臨床試驗（下稱銀杏內(nèi)酯B項目）啟動會在南寧市第一人民醫(yī)院順利舉行。此次會議的召開標志著銀杏內(nèi)酯B項目正式進入Ⅰ期臨床研究階段。 銀杏內(nèi)酯B注射液屬化藥1類新藥，將采用單中心、隨機、雙盲、安慰劑對照、單劑量及多劑量遞增給藥的試驗設計，設多個劑量組進行劑量遞增，觀察受試者的安全性和耐受性，同時進行藥代動力學特征及初步的物料平衡評估。博濟醫(yī)藥將為其Ⅰ期臨床研究提供全程CRO服務。 南寧市第一人民醫(yī)院機構(gòu)辦公室主任兼I期研究室主任鐘慧（項目PI）、I期研究室副主任劉曦、博濟醫(yī)藥I期臨床運營部項目經(jīng)理龔玲等有關單位負責人參加了此次會議。 會議伊始，鐘慧教授代表臨床試驗機構(gòu)發(fā)表講話。她表示，我國的心腦血管患者數(shù)排世界第一，銀杏內(nèi)酯B注射液作為治療心腦血管一類新藥，其重要意義和價值不言而喻。經(jīng)過前期多輪會議探討，目前已對研究的整體策劃、臨床試驗方案等板塊進行了充分論證，希望在各方的共同努力下，保質(zhì)保量快速推進該項目的Ⅰ期臨床試驗，為該項目的后續(xù)研究打下堅實的基礎。 隨后，龔玲就該項目研究背景、試驗方案、試驗流程、藥物配制標準操作流程、試驗過程中的特別注意事項等進行了匯報，并介紹項目EDC使用、生物樣本預處理注意要點及SUASR上報要求等。與會者在鐘慧教授的帶領下就入排標準、藥物配制、受試者管理等問題進行了討論，并形成了一致意見。 博濟醫(yī)藥相關負責人介紹，在臨床上應用的銀杏類藥物多為采用有效部位為主藥的復方制劑，像銀杏內(nèi)酯B這種單一有效成分新藥有可能進一步提高療效，提高用藥的安全性，更易于控制藥品質(zhì)量，更有臨床應用前景，有望成為急性腦缺血性類疾病治療藥物的新選擇。“銀杏內(nèi)酯B項目前各項準備工作進展順利，預計首批受試者將于下周入組。” 關于博濟醫(yī)藥 臨床研究服務： 博濟醫(yī)藥擁有一支規(guī)模龐大、專業(yè)成熟的臨床研究隊伍，可提供包括醫(yī)學、項目管理、監(jiān)查、稽查、數(shù)據(jù)管理和統(tǒng)計分析、生物樣本檢測在內(nèi)的臨床試驗全流程解決方案。截至2020年，博濟醫(yī)藥服務的客戶超1000家，完成800多項臨床試驗項目，助力客戶獲得新藥證書60多項、生產(chǎn)批件超過80項。擁有豐富的臨床試驗服務經(jīng)驗，服務項目涵蓋臨床研究各個領域，在腫瘤、肝病、消化等創(chuàng)新藥領域擁有獨特的臨床服務體系。 博濟醫(yī)藥在全國設有40多個臨床監(jiān)查網(wǎng)點，與全國近600個臨床試驗機構(gòu)展開合作，并運用ORACLE OC/RDC及CTMS系統(tǒng)，控制臨床數(shù)據(jù)采集的及時性、管理臨床試驗過程的規(guī)范性。
2021-08-13
