表2. 對(duì)于經(jīng)監(jiān)管級(jí)、科學(xué)級(jí)或研究級(jí)驗(yàn)證的分析方法在研究中樣本分析的接受標(biāo)準(zhǔn)
參照（比）標(biāo)準(zhǔn)物
研究級(jí):對(duì)于研究級(jí)的方法驗(yàn)證，允許使用沒(méi)有CoA的參照（比）標(biāo)準(zhǔn)物，即比較標(biāo)準(zhǔn)物（comparator），或未表征的標(biāo)準(zhǔn)物（uncharacterized standard），特別是在無(wú)法獲得完全表征的標(biāo)準(zhǔn)物的時(shí)候，例如在藥物發(fā)現(xiàn)或開(kāi)發(fā)早期。在更早期階段，由于藥物生產(chǎn)和隨后的研究的時(shí)間安排以及可用的藥物數(shù)量往往無(wú)法對(duì)生物藥物原液進(jìn)行完整的表征，為了使人們對(duì)分析結(jié)果有更大的信心，在可能的情況下最好使用與動(dòng)物研究中使用的相同批次藥物作為參照（比）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行樣本分析。
監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證：對(duì)于校準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確度和精密度的評(píng)估應(yīng)該在6次獨(dú)立運(yùn)行中進(jìn)行且持續(xù)幾天，在驗(yàn)證期間由多位分析人員執(zhí)行。
經(jīng)監(jiān)管驗(yàn)證的方法必須具有至少6個(gè)非零校準(zhǔn)點(diǎn)濃度的STD，其中至少75%的校準(zhǔn)點(diǎn)濃度的準(zhǔn)確度（偏差bias）和精密度（%CV）均應(yīng)≤20%。在LLOQ和ULOQ校準(zhǔn)點(diǎn)水平上：準(zhǔn)確度≤25%偏差，精密度≤25%CV。錨定點(diǎn)可以用于取得最佳的曲線擬合，但是其濃度超出了定量范圍（ROQ），因此不用于對(duì)校準(zhǔn)曲線的評(píng)估。用于研究前方法驗(yàn)證的非線性曲線擬合和加權(quán)方式也必須應(yīng)用于研究中樣本分析，樣本分析對(duì)STD準(zhǔn)確度和精密度的要求與驗(yàn)證階段相同。不能對(duì)LLOQ以下或ULOQ以上的未知樣本濃度結(jié)果進(jìn)行外推計(jì)算。
監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證還要求使用5個(gè)質(zhì)量控制樣品（高質(zhì)量控制點(diǎn)[HQC]、中質(zhì)量控制點(diǎn)[MQC]、低質(zhì)量控制點(diǎn)[LQC]（在LLOQ校準(zhǔn)點(diǎn)濃度的3倍以內(nèi)）、該方法的LLOQ[LLOQ QC]和ULOQ[ULOQ QC]），或者使用預(yù)期研究樣本濃度范圍內(nèi)的至少3個(gè)質(zhì)量控制點(diǎn)濃度來(lái)評(píng)估分析方法的準(zhǔn)確度和精密度。偏差和%CV的接受標(biāo)準(zhǔn)均為≤20%，在LLOQ和ULOQ校準(zhǔn)品水平上，偏差≤25%，%CV≤25%。QC的可接受總誤差（總偏差和%CV之和）為≤30%，HQC、MQC和LQC QC的可接受總誤差≤30%，LLOQ QC 和ULOQ QC可接受總誤差為≤40%。
在研究中樣本分析時(shí)，一般使用3個(gè)水平的QCs(HQC、MQC和LQC)進(jìn)行復(fù)孔分析，準(zhǔn)確度和精密度的偏差和%CV均需≤20%。如果每個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)（復(fù)孔分析）的50%和6個(gè)QCs中的至少4個(gè)滿足上述標(biāo)準(zhǔn)，則該分析運(yùn)行可以接受，這符合“4-6-20”規(guī)則。
科學(xué)級(jí)驗(yàn)證：在進(jìn)行研究前科學(xué)級(jí)驗(yàn)證的過(guò)程中，STD曲線評(píng)估以及準(zhǔn)確度和精密度評(píng)估可以由一名或兩名分析師在2天內(nèi)完成，可用來(lái)減少研究前階段的持續(xù)時(shí)間。這與監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證所需要的更穩(wěn)健評(píng)估相反，但是是可以接受的，因?yàn)樗从沉嗽摲椒ㄖ皇嵌唐诘貞?yīng)用于樣本分析。科學(xué)級(jí)驗(yàn)證的研究前驗(yàn)證和研究中樣本分析的目標(biāo)接受標(biāo)準(zhǔn)與監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證的目標(biāo)接受標(biāo)準(zhǔn)一致，但基于數(shù)據(jù)的預(yù)期用途等科學(xué)原因，可能會(huì)應(yīng)用更寬泛的接受標(biāo)準(zhǔn)（例如>20%偏差和 %CV >20%）。在后續(xù)的"討論"章節(jié)中，所有的接受標(biāo)準(zhǔn)都表示目標(biāo)/預(yù)期接受標(biāo)準(zhǔn)。
在經(jīng)過(guò)科學(xué)驗(yàn)證的方法中，校準(zhǔn)曲線也應(yīng)該至少包括6個(gè)非零校準(zhǔn)點(diǎn)濃度。準(zhǔn)確度和精密度的偏差和%CV目標(biāo)均應(yīng)≤20%（對(duì)LLOQ和ULOQ校準(zhǔn)點(diǎn)：偏差≤25%，%CV≤25%）。研究前科學(xué)級(jí)驗(yàn)證應(yīng)使用5個(gè)級(jí)別的QCs (HQC、MQC、LQC、LLOQ QC和ULOQ QC)或者預(yù)期研究樣本濃度范圍內(nèi)至少有三個(gè)QC濃度，準(zhǔn)確度和精密度的目標(biāo)偏差和%CV均≤20%（LLOQ和ULOQ：偏差≤25%，CV≤25%），HQC、MC和LQC的目標(biāo)總誤差為≤30%（ULOQ QC和LLOQ QC為≤40%）。
在樣本分析時(shí)，應(yīng)使用三個(gè)級(jí)別的QCs（HQC、MQC和LQC，復(fù)孔分析），其準(zhǔn)確度和精密度的目標(biāo)偏差和%CV均≤20%，如果每個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)（復(fù)孔分析）的50%和6個(gè)QCs中的至少4個(gè)滿足上述接受標(biāo)準(zhǔn)，則該分析運(yùn)行可以接受，這符合“4-6-20”規(guī)則，也適用于監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證的分析方法。
應(yīng)該注意的是，如果在科學(xué)級(jí)驗(yàn)證的研究前驗(yàn)證階段，更寬泛的接受標(biāo)準(zhǔn)被證明是合理的，并適用于STDs和QCs的準(zhǔn)確性和精密度，那么在樣本分析階段，這些更寬泛的接受標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)該適用于分析運(yùn)行的接受。
研究級(jí)驗(yàn)證：研究級(jí)驗(yàn)證的準(zhǔn)確性和精密度以及STD評(píng)估應(yīng)由一個(gè)分析人員在3次獨(dú)立的運(yùn)行中進(jìn)行評(píng)估，這表示研究級(jí)方法驗(yàn)證的嚴(yán)謹(jǐn)性降低了，但這卻是可以接受的，因?yàn)樗从沉嗽摲椒ㄖ皇怯邢薜赜糜跇颖痉治?，以支持?nèi)部的早期決策。
研究級(jí)驗(yàn)證的研究前驗(yàn)證和研究中樣本分析的目標(biāo)接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該比基于科學(xué)級(jí)或監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證（例如偏差＞20%和%CV＞20%）更為寬松。更寬泛的準(zhǔn)確性和精密度接受標(biāo)準(zhǔn)可用于對(duì)STDs的評(píng)估（例如30%偏差，在LLOQ和ULOQ可以有40%偏差）。在另一方面，如果STD的表現(xiàn)說(shuō)明可以達(dá)到更嚴(yán)格的接受標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)該使用監(jiān)管級(jí)或科學(xué)級(jí)驗(yàn)證中采用的目標(biāo)接受標(biāo)準(zhǔn)或者其他更嚴(yán)格但合理的接受標(biāo)準(zhǔn)。
研究級(jí)驗(yàn)證中，應(yīng)評(píng)估至少3個(gè)級(jí)別的QCs（HQC、MQC和LQC），其準(zhǔn)確度和精密度的目標(biāo)接受標(biāo)準(zhǔn)為偏差30%和CV20%以內(nèi)。這是可以接受的，因?yàn)檫@三個(gè)QC的使用提供了對(duì)經(jīng)研究級(jí)驗(yàn)證的方法效能的充分控制。如果開(kāi)發(fā)階段數(shù)據(jù)表明可以滿足更嚴(yán)格地接受標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)采用監(jiān)管或科學(xué)級(jí)驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)或其他更嚴(yán)格的接受標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)該測(cè)試LLOQ和ULOQ QCs以供參考，但不需要設(shè)立接受標(biāo)準(zhǔn)。
對(duì)于使用經(jīng)研究級(jí)驗(yàn)證方法進(jìn)行的樣本分析，如果在研究前驗(yàn)證時(shí)，使用了更寬泛的接受標(biāo)準(zhǔn)，則可以擴(kuò)展用于經(jīng)監(jiān)管級(jí)和科學(xué)級(jí)驗(yàn)證的“4-6-20”規(guī)則。應(yīng)該評(píng)估3個(gè)級(jí)別的QCs（HQC、MQC和LQC，復(fù)孔分析）。HQC、MQC和LQC的6個(gè)稀釋QCs中必須有4個(gè)回算到其標(biāo)稱值的30%以內(nèi)（“4-6-30”規(guī)則）；在接受了的QCs中，必須有4個(gè)QCs的%CV≤20%。如果在研究前驗(yàn)證階段使用了更嚴(yán)格的接受標(biāo)準(zhǔn)，則在樣本分析期間也必須采用那些標(biāo)準(zhǔn)。
監(jiān)管級(jí)、科學(xué)級(jí)或研究級(jí)：通常，許多LBA方法的ROQ有限，因此有必要對(duì)高濃度樣本進(jìn)行（多次）稀釋，以使其進(jìn)入到ROQ之內(nèi)。對(duì)于所有級(jí)別的驗(yàn)證，都有必要證明濃度接近或超過(guò)最高劑量水平的預(yù)計(jì)最大濃度（Cmax），或大于分析方法的既定ULOQ的樣本，可以稀釋進(jìn)入既定的ROQ。
為了評(píng)估稀釋線性度，將已知的待測(cè)物加入到空白混合樣本基質(zhì)中來(lái)制備濃度在Cmax或附近（或高于ULOQ）的樣品，然后稀釋這些“稀釋線性樣品”，使稀釋后的濃度落在ROQ之內(nèi)。如果回算的稀釋前濃度在標(biāo)稱濃度的20%以內(nèi)，則該方法的稀釋線性度對(duì)于需要進(jìn)行監(jiān)管驗(yàn)證的方法是可以接受的。對(duì)于科學(xué)級(jí)和研究級(jí)驗(yàn)證，可以使用更寬泛的接受標(biāo)準(zhǔn) (即驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)與QC樣品相同)。
此外，稀釋線性實(shí)驗(yàn)還能夠識(shí)別可能的"鉤狀效應(yīng)"，需要評(píng)估鉤狀效應(yīng)（prozone effect）以便為研究中樣本分析確立一個(gè)合理的稀釋方案。在經(jīng)科學(xué)級(jí)或研究級(jí)驗(yàn)證的方法支持的研究中，分析方法規(guī)定的最低稀釋倍數(shù)(MRD)下如果預(yù)期的Cmax不高于ULOQ，那么所有樣本分析均可在單一稀釋倍數(shù)下進(jìn)行，這意味著可能不需要評(píng)估稀釋線性度，同一微孔板上QCs的稀釋足以證明這一點(diǎn)。
監(jiān)管級(jí)：對(duì)于需要監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證的方法，在研究前評(píng)估生物基質(zhì)中待測(cè)物的穩(wěn)定性是至關(guān)重要的。穩(wěn)定性評(píng)估應(yīng)涵蓋在研究期間所有預(yù)期的樣本儲(chǔ)存條件，包括臨床或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)期間、運(yùn)輸期間任何中間地點(diǎn)和PK生物分析實(shí)驗(yàn)室。長(zhǎng)期穩(wěn)定性必須至少涵蓋從樣本采集到生物分析完成之前，任何研究樣本在相關(guān)儲(chǔ)存條件下的儲(chǔ)存時(shí)間。此外，還必須評(píng)估預(yù)期的樣本處理過(guò)程中的穩(wěn)定性，包括冷凍-解凍穩(wěn)定性、工作臺(tái)穩(wěn)定性（或樣本處理?xiàng)l件）以及如果在分析前進(jìn)行樣本處理，處理后樣本的穩(wěn)定性。已建立的穩(wěn)定性應(yīng)達(dá)到或超過(guò)研究樣本的實(shí)際處理時(shí)間和條件。至少應(yīng)該在HQC和LQC水平上評(píng)估樣本的穩(wěn)定性，并與新制備的STD和QCs進(jìn)行比較。如果穩(wěn)定性樣本的分析數(shù)值的偏差在15%或20%范圍內(nèi)，則滿足穩(wěn)定性的接受要求。
科學(xué)級(jí)：經(jīng)科學(xué)級(jí)驗(yàn)證的分析方法的生命周期通常很短，而且參照（比）標(biāo)準(zhǔn)物本身的穩(wěn)定性往往沒(méi)有很好地建立起來(lái)。參照（比）標(biāo)準(zhǔn)物穩(wěn)定性數(shù)據(jù)的缺乏也意味著沒(méi)有必要研究待測(cè)物在生物基質(zhì)中的長(zhǎng)期穩(wěn)定性，建議只進(jìn)行短期穩(wěn)定性研究，以便于在樣本分析時(shí)合適地存儲(chǔ)和處理研究樣本。因此，在研究前驗(yàn)證階段，通常建議在計(jì)劃的儲(chǔ)存條件下進(jìn)行有限的冷凍-解凍測(cè)試和短期的穩(wěn)定性研究（數(shù)周或數(shù)月，而不是數(shù)年）。如果在研究開(kāi)始前，預(yù)知需要某些獨(dú)特的存儲(chǔ)環(huán)境，則應(yīng)在研究前階段評(píng)估那些條件下的穩(wěn)定性。與監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證一樣，至少應(yīng)在HQC和LQC水平上評(píng)估穩(wěn)定性在科學(xué)級(jí)驗(yàn)證中使用的接受標(biāo)準(zhǔn)，可用于穩(wěn)定性樣品（但是如果對(duì)驗(yàn)證QCs使用更寬泛的接受標(biāo)準(zhǔn)，那這也適用于穩(wěn)定性樣品）。
研究級(jí)：經(jīng)研究級(jí)驗(yàn)證的方法的生命周期特別短，因?yàn)樵S多使用這些方法的研究也是短期的。參照（比）標(biāo)準(zhǔn)物的穩(wěn)定性一般未知，因此也不需要長(zhǎng)期穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，常規(guī)地（routinely）評(píng)估短期穩(wěn)定性，應(yīng)該只有在對(duì)待測(cè)物的經(jīng)驗(yàn)有限的情況下進(jìn)行。如果存在已知或疑似的藥物不穩(wěn)定性，那么了解它們對(duì)樣本分析結(jié)果的影響很可能是有益的。因此，建立樣本的基本穩(wěn)定性如凍融或有限的工作臺(tái)穩(wěn)定性，以進(jìn)行樣本處理，會(huì)有助于獲得可靠的分析結(jié)果。如果需要評(píng)估穩(wěn)定性，至少應(yīng)該在HQC和LQC水平上進(jìn)行，研究級(jí)驗(yàn)證中使用的接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)適用于接受穩(wěn)定性樣品（如果對(duì)驗(yàn)證QCs使用更窄的接受標(biāo)準(zhǔn)，這也適用于穩(wěn)定性樣本）。
監(jiān)管級(jí)：相關(guān)指南文件沒(méi)有直接探討穩(wěn)健性和耐用性評(píng)估。但是，從行業(yè)的最佳實(shí)踐白皮書(shū)中可以得知，監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證經(jīng)常有包括此類評(píng)估，以確保該方法在實(shí)驗(yàn)室通?？赡馨l(fā)生的條件下產(chǎn)生可重現(xiàn)的結(jié)果。評(píng)估穩(wěn)健性時(shí)，需要引入特定的變化（如孵育溫度、孵育時(shí)間、光照或基質(zhì)），然后研究該方法的一致性（consistency）。此外，一般通過(guò)研究下述內(nèi)容來(lái)評(píng)估該分析方法的耐用性：正常進(jìn)行分析過(guò)程中可能出現(xiàn)的不同操作條件，如不同的分析人員、不同的儀器或試劑等，建議進(jìn)行運(yùn)行大小的測(cè)試（batch size testing）。穩(wěn)健性和耐用性評(píng)估應(yīng)該反映預(yù)期的操作條件和潛在的變化，而該分析方法在其整個(gè)生命周期內(nèi)會(huì)在這些操作條件下或潛在變化真的發(fā)生時(shí)被使用。
科學(xué)級(jí)：經(jīng)科學(xué)級(jí)驗(yàn)證的方法，不需要像監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證方法那樣在多個(gè)分析人員、設(shè)備和持續(xù)時(shí)間上展示相同水平的穩(wěn)健性，因?yàn)檫@些分析方法的生命周期更短，因而預(yù)期的變化更少。經(jīng)科學(xué)級(jí)驗(yàn)證的方法在進(jìn)行樣本分析的實(shí)操條件時(shí)，穩(wěn)健性和耐用性評(píng)估會(huì)幫助提供足夠的信心來(lái)使用該方法，但無(wú)需在這些條件之外進(jìn)行更多的評(píng)估。因此，如果一個(gè)分析人員正在對(duì)有限的設(shè)備進(jìn)行研究前驗(yàn)證和研究中樣本分析，并有足夠的試劑來(lái)完成整個(gè)分析任務(wù)，則穩(wěn)健性評(píng)估可能僅限于運(yùn)行大小的測(cè)試，以確保微孔板的批量處理足以支持樣本分析。
研究級(jí)：由于經(jīng)研究級(jí)驗(yàn)證的方法的應(yīng)用非常有限，因而對(duì)研究級(jí)驗(yàn)證的分析方法一般不需要評(píng)估其穩(wěn)健性和耐用性，但如果要分析大量的或體積有限的樣本，則評(píng)估運(yùn)行大?。╞atch size assessment）可能是有益的。
監(jiān)管級(jí)：必須證明需要監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證的分析方法對(duì)待測(cè)物具有選擇性，以證明基質(zhì)成分不會(huì)干擾分析結(jié)果。應(yīng)該使用至少10個(gè)單體的空白生物基質(zhì)，并在LLOQ水平上外加該生物藥，以評(píng)估分析方法的選擇性。評(píng)估外加待測(cè)物（接近LLOQ濃度）樣品的回收率，以確保基質(zhì)效應(yīng)不影響該方法在上述濃度的回收率。如果可能，建議在相關(guān)疾病狀態(tài)的生物基質(zhì)中評(píng)估回收率，并且也對(duì)基于血清或血漿的分析方法、對(duì)高血脂或溶血樣本評(píng)估回收率。如果在10個(gè)樣本中8個(gè)外加待測(cè)物的回收率在標(biāo)稱值的25%的偏差范圍內(nèi)，并且對(duì)未外加待測(cè)物的樣本所測(cè)定的待測(cè)物濃度小于LLOQ，則該分析方法的選擇性評(píng)估符合接受標(biāo)準(zhǔn)。如果此評(píng)估的結(jié)果，在方法開(kāi)發(fā)階段發(fā)現(xiàn)不可接受，則建議在驗(yàn)證之前提高LLOQ的濃度。
科學(xué)級(jí)：需要經(jīng)科學(xué)級(jí)驗(yàn)證的方法應(yīng)該評(píng)估其選擇性，與監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證一樣，評(píng)估應(yīng)包含10個(gè)單體的生物基質(zhì)樣本，并且要評(píng)估外加和未外加待測(cè)物的樣品。相反，并不需要對(duì)高脂質(zhì)或溶血樣本（血清或血漿樣本）評(píng)估選擇性。另外，只有在疾病狀態(tài)已知會(huì)引入干擾物質(zhì)的情況下，才建議評(píng)估疾病狀態(tài)的生物基質(zhì)。接受標(biāo)準(zhǔn)與監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證一致：80%的樣本的回收率偏差需要在25%之內(nèi)。
研究級(jí)：對(duì)于研究級(jí)驗(yàn)證，不需要全面地評(píng)估選擇性，因?yàn)樵跍y(cè)試LLOQ QC樣品時(shí)，已經(jīng)在混合基質(zhì)中進(jìn)行了近似的選擇性評(píng)估。如果某個(gè)動(dòng)物中存在所服用的藥物的內(nèi)源性同源物或其他有科學(xué)原因，則可在較少數(shù)量的單體基質(zhì)樣本中評(píng)估選擇性。用于STD曲線中LLOQ的接受標(biāo)準(zhǔn)也適用于選擇性樣品。
監(jiān)管級(jí)：對(duì)于需要監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證的方法，需要證明用于測(cè)試的試劑僅與該生物藥即待測(cè)物結(jié)合，并且不與其他相關(guān)化合物或伴隨藥物發(fā)生交叉反應(yīng)。應(yīng)在該方法的LLOQ和ULOQ水平上，用QCs評(píng)估特異性。例如結(jié)構(gòu)相似的生物藥、抗藥物抗體、可溶性藥物靶點(diǎn)、已知的伴隨藥物等，偏差在25%以內(nèi)的QCs即滿足可以接受的特異性。應(yīng)將已證明的干擾物質(zhì)記錄在案。另外，如果干擾物妨礙了PK數(shù)據(jù)的適當(dāng)解釋，則需要在方法驗(yàn)證之前，采取措施（如重新開(kāi)發(fā)該方法）以減輕其影響。
科學(xué)級(jí)：對(duì)監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證的方法，必須評(píng)估其特異性，但對(duì)于科學(xué)級(jí)驗(yàn)證來(lái)說(shuō)則不是必須的。一般來(lái)說(shuō)，需要科學(xué)驗(yàn)證的方法無(wú)需費(fèi)力地開(kāi)發(fā)分析方法，以減輕來(lái)自抗藥物抗體（ADA）或可溶性靶點(diǎn)的干擾，因?yàn)閲?yán)格證明該方法可接受的要求太高，除非相關(guān)干擾非常普遍，且妨礙了基本的PK數(shù)據(jù)解釋。
研究級(jí)：可省略特異性測(cè)試。對(duì)研究級(jí)驗(yàn)證的方法，無(wú)需全面地描述或減輕干擾，因此不需要評(píng)估方法的特異性。
監(jiān)管級(jí)：由于研究前驗(yàn)證所用的STDs和QCs可能不能完全模擬研究樣本的性能，作為監(jiān)管機(jī)構(gòu)的要求，ISR是為了確保所報(bào)告的樣本濃度的可靠性，且視為準(zhǔn)確性的模擬評(píng)估。對(duì)于1000個(gè)樣本以內(nèi)的研究，ISR需要測(cè)試10%的樣本；而對(duì)于1000個(gè)樣本以上的研究，應(yīng)進(jìn)行5%的ISR測(cè)試或者測(cè)試7%的所有研究樣本。這些樣本應(yīng)來(lái)自Cmax附近和藥物消除階段。在這一評(píng)估中，ISR樣本在另一個(gè)日期重新測(cè)試(重復(fù)repeat)，以模擬最初的生物分析(原始o(jì)riginal)。該評(píng)估比較重復(fù)（repeat）和原始（original）測(cè)定結(jié)果之間的百分比差異，如果二者結(jié)果相差≤30% ，則認(rèn)為樣本的測(cè)定結(jié)果是可以接受的。如果2/3的測(cè)試樣本（67%）符合樣品接受標(biāo)準(zhǔn)，則整個(gè)評(píng)估合格。如果評(píng)估失敗，必須進(jìn)行調(diào)查以確定失敗原因，并采取適當(dāng)措施，盡量減少不準(zhǔn)確的結(jié)果。
此外，還應(yīng)該使用ISR樣本評(píng)估方法的平行性。平行性在概念上類似于稀釋線性，但使用實(shí)際研究樣本進(jìn)行連續(xù)稀釋，單個(gè)樣本之間的個(gè)別基質(zhì)成分的差異可能會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果。雖然FDA指南草案規(guī)定，“稀釋后研究樣本的平行性應(yīng)使用稀釋后的校準(zhǔn)品進(jìn)行評(píng)估，以檢測(cè)基質(zhì)效應(yīng)”，但沒(méi)有就接受標(biāo)準(zhǔn)提出指導(dǎo)。EMA指南對(duì)評(píng)估樣本平行性的期望提供了更多信息："應(yīng)使用空白基質(zhì)稀釋高濃度的研究樣本（最好接近Cmax）到至少三個(gè)濃度。稀釋系列中樣本之間的精密度不應(yīng)超過(guò)30%。”因此，應(yīng)選擇在Cmax附近的研究樣本并連續(xù)稀釋，使得至少三個(gè)稀釋濃度在方法的ROQ內(nèi)。如果稀釋結(jié)果回算后濃度的%CV≤30%，則樣品符合驗(yàn)收要求。如果評(píng)估失敗，必須制定一個(gè)計(jì)劃，說(shuō)明如何報(bào)告稀釋樣本的測(cè)定濃度。
科學(xué)級(jí)：對(duì)于經(jīng)科學(xué)級(jí)驗(yàn)證的方法，常規(guī)的話不會(huì)在研究中對(duì)ISR和平行性做一步的驗(yàn)證/評(píng)估。如果在研究中樣本分析過(guò)程觀察到樣本稀釋的非平行性，則可以按照與監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證相同的設(shè)計(jì)和接受標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)估平行性。監(jiān)管級(jí)驗(yàn)證的指南文件規(guī)定：對(duì)支持人體生物等效性研究、關(guān)鍵PK或PD研究以及非臨床安全性研究必須評(píng)估ISR和平行性，這些研究的結(jié)果將被納入向監(jiān)管機(jī)構(gòu)提交的文件?？茖W(xué)級(jí)驗(yàn)證并非是為了長(zhǎng)期應(yīng)用該分析方法而驗(yàn)證的，使用該類方法的主要目的是支持非GLP（non-GLP）或非關(guān)鍵性研究，這些研究的數(shù)據(jù)不會(huì)用于支持監(jiān)管申報(bào)文件中的主要結(jié)論。
研究級(jí)：經(jīng)研究級(jí)驗(yàn)證的方法僅會(huì)短期使用，主要用于候選藥物的選擇或早期臨床前研究，其數(shù)據(jù)僅用于內(nèi)部決策。因此，不需要評(píng)估ISR和平行性，除非特別有必要。
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